鑑別此胺基酸即可了解N-末端是何種胺基酸

2021-01-09 亞菲講娛樂

2)末端分析　其方法較多，這裡我們只介紹較常用的幾種。

(1)N-末端測定

A.二硝基氟苯法(FDNB，DNFB)：1945年Sanger提出此方法，是他的重要貢獻之一。

DNP-胺基酸用有機溶劑抽提後，通過層析位置可鑑定它是何種胺基酸。Sanger用此方法測定了胰島素的N末端分別為甘氨酸及苯丙氨酸。

B.氰酸鹽法：1963年Stank及Smyth介紹了一種測定N末端的新方法，步驟如下：

由於乙內醯脲胺基酸不帶電荷，因此可用離子交換層析法將它與游離胺基酸分開，分離所得的乙內醯脲胺基酸再被鹽酸水解，重新生成游離的胺基酸，鑑別此胺基酸即可了解N-末端是何種胺基酸。

C.二甲基氨基萘磺醯氯法：1956年Hartley等報告了一種測定N-末端的靈敏方法，採用1-二甲基氨基萘-5-磺醯氯，簡稱丹磺醯氯。它與游離氨基末端作用，方法類似於Sanger的DNFB法，產物是磺醯胺衍生物。

丹磺醯鏈酸具有強烈的黃色螢光。此法優點為靈敏性較高(比FDNB法提高100倍，樣品量小於1毫微克分子)及丹磺醯胺基酸穩定性較高(對酸水解穩定性較DNP胺基酸高)，可用紙電泳或聚醯胺薄膜層析鑑定。

(2)C-末端分析

A.肼解法：這是測定C-末端最常用的方法。將多肽溶於無水肼中，100℃下進行反應，結果羧基末端胺基酸以游離胺基酸狀釋放，而其餘肽鏈部分與肼生成胺基酸肼。

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  • 密碼子結構與胺基酸側鏈析性之間也有一定關係
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