上調miR-133a-3p可調節信號通路介導的內質網應激

2020-12-03 AbMole生物

AbMole精研抑制劑十年，最新的科研動態不斷與您分享。本期與您分享的是：上調 miR-133a-3p可調節IGF1R/PI3K/Akt信號通路介導的內質網應激，提高蟾蜍硫堇誘導的GC細胞死亡。

Bufothionine已被用於GC的治療，但其內在機制卻有待進一步研究。本研究的主要目的即揭示其潛在的作用機制。具體來說，研究人員採用CCK-8法和集落形成法檢測細胞增殖、流式細胞儀(FCM)和TUNEL法測定細胞凋亡率、DCFH-DA探針測定細胞內ROS含量、qRT-PCR測定miRNA水平, Western Blot檢測蛋白含量、雙螢光素酶基因法驗證IGF1R mRNA中 miR-133a-3p和3』URT區域的結合位點、免疫組化(IHC)檢測小鼠腫瘤組織中Ki-67的表達。

具體來說，Bufothionine能夠抑制細胞活力、觸發內質網應激、促進GC細胞ROS的產生。內質網應激抑制劑Salburinal (Sal)和ROS清除劑NAC都可以抑制Bufothionine誘導的GC細胞死亡。此外，Bufothionine可上調miR-133a-3p，過表達的miR-133a-3p可增強Bufothionine誘導的細胞死亡，敲除miR-133a-3p後細胞凋亡顯著減少。此外,miR-133a-3p通過胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)抑制PI3K/Akt信號通路，同時Bufothionine通過上調miR-133a-3p抑制IGF1R和限制PI3K/Akt級聯。值得注意的是，過表達miR-133a-3p對bufothionine誘導的GC細胞死亡的促進作用會因為IGF1R的上調而消除，在PI3K/Akt級聯抑制劑作用下強化。

總結：Bufothionine通過介導miR-133a-3p/IGF1R/PI3K/Akt軸促進GC細胞凋亡、內質網應激與ROS產生。

CCK-8試劑盒為MTT 法的替代方法，是一種基於WST(水溶性四唑鹽，化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應用於細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

作者在研究過程中，考察了Bufothionine對GC細胞增殖的抑制能力。在實驗中，分別用0、20、50μg/mL的Bufothionine處理GC細胞，處理時間維0 h、24 h，48 h, 72 h和96 h。採用了Abmole的CCK-8法檢測細胞增殖，獲得了優質的數據結果。CCK試劑盒使用方便，省去了洗滌細胞，不需要同位素和有機溶劑；檢測靈敏度高，甚至可以測定較低細胞密度；其重複性也優於MTT法。

鳴謝：Zhi-Hao Hu, Guo-Jun Wang, Rui-Xin Li, Tian-Yu Zhu, Zhuo-Yin Wang, Heng-Xuan Ding, Xiu-Mei Hu, Upregulation of miR-133a-3p enhances Bufothionine-induced gastric cancer cell death by modulating IGF1R/PI3K/Akt signal pathway mediated ER stress, Life Sciences, Volume 259, 2020,118180.

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