GB2763-2019《食品安全國家標準-食品中農藥最大殘留限量》於2019年08月15日發布，並於今年02月15日執行，針對2763中農殘檢測的熱點問題，安譜實驗開展的系列線上食品中農殘檢測技術專場培訓取得了良好的反映，今天小編根據各位老師關注的熱點問題，整理了農殘檢測八大熱點問題解答，以饗讀者。
Q：上機前加入內標的目的是什麼，蔬菜水果的檢測，為什麼在上機前加入內標，內標的加入時間怎麼去確定？
A：內標法是一種間接或者相對的校正方法，在分析測定樣品中某組分含量時，加入一種內標物質以校消除出於操作條件的波動而對分析結果產生的影響，以提高分析結果的準確性和可靠性。使用內標法要求內標物質具備以下性質：
1.試樣中不存在的物質
2.與待測組分性質接近（化學結構、揮發性、極性、溶解度、色譜行為和響應特徵一致）
3.純度高，穩定（以便於能夠準確的添加到樣品中）
4.與樣品互溶
5.不與其他組分發生相互幹擾（能夠準確分離和定量）
對於內標的加入時間，同位素內標，建議在樣品處理前就加入，這樣可以監測和消除整個處理過程中操作條件波動引起的結果誤差，而且認為前處理操作，同位素內標和待分析物在處理過程中受到的影響是一致，它監控了整個分析過程，而對於非同位素內標，一般在上機前加入，只考慮儀器波動對分析結果的影響，它只監控了儀器狀態對於結果的準確性的影響。
Q：如果GB2763沒有推薦相應的檢測方法，怎麼去做該基質中相應農藥的殘留檢測，另外，如果2763推薦的方法，不包括檢測基質，如茶葉中溴 氰菊酯的檢測方法在2763裡指定的是GB/T5009.110 ，但是GB/T5009.110的檢測基質為：茶葉、穀物、蔬菜？
A：如果GB2763中對於某一個限量值，沒有提供相對應的檢測方法，如苯菌酮，那麼這個限量值一定是一個臨時限量，對於臨時限量的檢測方法，可以適用現行有效的標準或者規定方法，推廣到臨時限量的檢測項中，並對擴充的方法進行驗證，GB2763在規範性文件引用文件說明中指出：「 在本標準發布後，新發布實施的食品安全國家標準（GB23200）同樣適用於相應參數的檢測。」這表明了對於沒有推薦檢測方法的限量值檢測項，國家強制性標準GB23200等系列標準，同樣可以適用於GB2763的限量值的檢測。GB2763-2019中溴腈菊酯在茶葉基質中的推薦檢測方法為GB/T5009.110和GB23200.113，而GB/T5009.110中的檢測方法規定檢測基質為：穀物和蔬菜，沒有茶葉。對於GB2763的推薦方法，有兩種方式去解讀，一種是「按照標準」，按照標準就是該標準的適用範圍是完全涵蓋GB2763給出的方法的基質；另外一個是「參照標準」，參照標準就是標準的適用範圍不涵蓋GB2763給出的基質，對於參照標準，需要對擴充了的基質進行可靠性驗證，以確定該標準在超出範圍外的基質，檢測的結果適用和可靠。
Q：什麼是陽性樣品，陽性樣品怎麼定量？
A：陽性樣品是依據檢測目標物來定的，如果樣品中不含有關注檢測的目標物質，就稱為陰性樣品，如果含有檢測的目標物，且其含量超過了限量標準，就稱為陽性樣品，陽性樣品涉及兩個概念，一個概念是「檢出」，另外一個是「超標」。對於超標的樣品一定是陽性樣品，對於所有不得檢出的樣品，單從檢出概念來說，檢出就屬於陽性樣品。關於定量，2386號公告，給出了兩種定量方式，一種是標準曲線法，另外一種是單點法，前者考證了整個結果的線性範圍，但是，對於樣品定值檢測，特別是陽性樣品，推薦單點法定量，因為農殘檢測的所使用的儀器為色譜和質譜，按照標準曲線法，測定一條標曲，需要5個點，每個點需要扎針進樣多次，而色譜和質譜的儀器的穩定時間都不是很長的，當標曲走完，儀器狀態可能已經發生了變化，這個時候使用標曲定量，是容易帶來很大誤差的，使用單點法就能有效避免，另外需要注意陽性樣品的報告值應該和單點定量的濃度在同一水平值附近，濃度水平差異在30%以內。
Q：怎樣做好一條合格的標準曲線？
A：根據NY/T 788-2018《農作物中農藥殘留試驗準則》第10.2.2.4規定：「以農藥的進樣濃度（mg/L）為橫坐標，響應值（峰高或峰面積）為縱坐標製作標準曲線，標準曲線的濃度範圍儘可能覆蓋2個數量級，至少5個點（不包括原點）」。農業部2386號公告中對標曲的制定規定：「包括定量限、最大殘留限量或10倍定量限。對於篩選方法，線性回歸方程的相關係數不低於0.98，對於確證方法，相關係數不低於0.99。測試溶液中被測組分濃度應在校準曲線的線性範圍內。」GB/T 27417對於線性範圍的規定：「校正用的標準點應儘可能均勻分布在關注的濃度範圍並能覆蓋該範圍。」對於實際樣品檢測，需要考察關注目標物在儀器上的響應，另外一般將限量值設置為線性中間值，以便於判定樣品檢測值是否超過限量值水平，並充分評估基質效應可能帶來定值的影響。
Q：什麼是檢測結果的不確定度，不確定度的來源有哪些，不確定度和誤差是同一回事嗎？
A：根據IUPAC的定義：不確定度（Uncertainty）為表徵合理地賦予被測量值的分散性，它是與測定結果相聯繫的參數，不確定度的含義是指由於測量誤差的存在，對被測定值的不能肯定的程度，表明了該結果的可信賴程度，實際上測定值是以一定概率分散在某個區域內。不確定度越小，表明結果與真值越接近。它包含兩個方面的內容，一個是區間的寬度，一個是該區間對應的置信概率。不確定度的來源有如下：
1.對樣品的定義不完整
2.分析方法不理想
3.取樣的代表性不夠
4.對分析過程過程中的環境影響認識或者控制不完善
5.儀器讀數的偏差
6.儀器性能的局限
7.標準物質的標準值的不準確
8.相同分析條件下，分析時的重複觀測值的變化。
不確定度與誤差是兩個截然不同的概念，不確定度能全面反映結果的分散性，不確定度總是不為0的正值，而誤差可能是正值，也可能是負值，甚至接近於0，不確定度原則上可以具體評定，而誤差是測定結果減去真值，一般由於真值未知，而不能計算，使用不確定度代替誤差，使得測試結果的質量評估更加科學。
Q：什麼是基質效應，怎麼消除或者避免基質效應，做基質匹配曲線時，選擇基質的原則是什麼？
A：基質效應是農藥殘留檢測中常見的問題，基質效應指的是被分析物以外的組分對待測物的影響，可以通過空白基質中添加相同濃度目標物質的響應與標準溶液中待測物質的響應的比值來進行評價，通常比值大於1，為基質增強，比值小於1為基質減弱。可以通過如下方式來減弱基質效應帶來的影響：
1.配製基質標準曲線
2.保護劑法（使用合適的試劑阻止活性位點與目標分析物之間的作用力）
3.同位素內標法
4.對於氣相色譜，定期維護進樣器（隔墊，襯管、玻璃棉）和色譜柱尤其對於基質效應的消弱有很好的效果。
在做基質加標回收實驗時，選擇與待測樣品同源的，不含待測組分的空白基質為宜，對於某一類蔬菜，水果樣品的檢測，平時可以積累這一類基質對於分析物質檢測的響應情況。
Q：關於標準SN/T 2441-2010《進出口食品中涕滅威、涕滅威碸、涕滅威亞碸殘留量檢測方法液相色譜-質譜/質譜法》中，代謝物最後是轉換成涕滅威嗎，直接加和嗎？
A：GB2763-2019規定的涕滅威的殘留標誌物為：「涕滅威及其氧類似物（亞碸、碸）之和，以滅涕威表示」。應按照外標法分別測定涕滅威、涕滅威碸、涕滅威亞碸的量，再按照轉換係數（conversation factor，CF）將代謝物轉換成涕滅威的量，最終報告以涕滅威的量出，關於轉換係數的計算，現舉例子如下：
涕滅威碸的轉換係數CF=涕滅威的分子量/涕滅威碸的分子量*100%=190.26/222.26=0.86
報告涕滅威的量=1.00*涕滅威的濃度+0.86*涕滅威碸的濃度+0.92*涕滅威亞碸的濃度。
Q：對於同分異構體怎麼實現較好的分離？S-氰戊菊酯和氰戊菊酯為什麼沒有分別制定限量值？
A：對於同分異構體：1.可以通過改變升溫程序，對於出峰靠的比較近的，一般可以降低升溫速率；2.換用不同極性的色譜柱來達到相同農藥的同分異構體的分離。
GB2763裡面對於氰戊菊酯和S-氰戊菊酯的殘留物為：氰戊菊酯（異構體之和）；化學名稱為 ( RS) - α- 氰基- 3- 苯氧基苄基 (RS) - 2- ( 4- 氯 苯基) - 3- 甲基丁酸酯。從化學結構可知, 氰戊菊酯有2個手性碳原子, 因此有4種光學異構體, 分別為SS, SR, RS, RR, 其生物活性依次為 SS>SR>RS>RR。其中SS異構體 生物活性比其他異構體高2～4倍。氰戊菊酯的4種光學異構體中, SR和RS, SS 和RR為2對對映異構體, 不能用色譜法直接分離4個異構體, 必須通過手性柱分離技術才能將2對對映體分別分開。目前通用的色譜技術一般只分離和定量的是SR+RS的總量及SS+RR的總量。正是由於4種異構體完全分離的分析手段要求太高, 而一般的檢測機構無法達到, 因此歐盟對氰戊菊酯的殘留限量分為2欄, 分別針對 SS+RR異構體總量及RS+SR異構體總量定出MRL。茶葉和蔬菜中 SS+RR異構體總量MRL分別為：0.05和0.02mg/kg；茶葉和蔬菜中 RS+SR異構體總量MRL分別為：0.05和0.02mg/kg。中國對於氰戊菊酯的MRL值，只做總量限值規定，另外日本、美國等也未分別規定S-氰戊菊酯與氰戊菊酯分別制定限量值。