近日,美國加州錫達斯西奈醫學中心再生醫學研究所的科學家們利用Milo在Cell(IF:36.216)發表文章:RapidGeneration of Somatic Mouse Mosaics with Locus-Specific, Stably IntegratedTransgenic Elements. Cell. 2019 Sep19;179(1):251-267.e24.
主要研究內容:
生成基因工程小鼠模型(用於體內基因功能分析的動物模型)的開發,既昂貴又費力。美國加州錫達斯西奈醫學中心再生醫學研究所的科學家們展示了一種新方法,稱為「MADR」(dual recombinase-mediated cassette exchange)。這種方法可以快速且廉價地模擬體內癌症發病機理中已發現的眾多驅動基因突變。他們的新方法(稱為MADR)在體細胞中產生單拷貝插入,並明確標記重組細胞。這種腫瘤模型的新方法(MADR)有可能成為研究腫瘤突變的更高通量的臨床前平臺,並有可能以患者特定的方式進行臨床前藥物發現。
他們使用Milo評估MADR模型中,經過工程改造的神經幹細胞的轉基因劑量的一致性。Milo結果表明:MADR細胞中TagBFP2蛋白表達的強度分布緊密(一致);而非MADR細胞具有蛋白表達動態範圍寬泛(分散,不一致),這表明新MADR方法在細胞譜系中產生了確定的單拷貝插入事件,並且呈現一致的轉基因劑量。
評論:Milo在本研究的必要性
評估轉基因劑量的一致性,需要對單個工程改造的神經幹細胞,進行基因表達產物(即蛋白質表達量)定量檢測。Milo單細胞western blot是目前全球唯一在單細胞水平進行蛋白質表達定量研究的技術。