慢性胰腺炎(CP)大鼠模型的建模方法

來源：二丁基二氯化物（DBTC）致慢性胰腺炎

模式動物品系：SPF級SD大鼠，健康，3-4W，雄性，體重為180g-200g。

實驗分組：實驗分六組：正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組。

實驗周期：4-6 weeks

建模方法：

建模方法： SD大鼠隨機分為3組。3組分別為建模4周，6周，8周。實驗前12h禁食，不禁水。 DBTC先溶於100%酒精，然後再與甘油混合（三者的比例為1:2:3），將大鼠放入固定器中，經尾靜脈注入以上DBTC溶液200ul（DBTC 8mg/kg 體重）。可導致不同時間點的大鼠慢性胰腺炎。 採用通過大鼠靜脈、腹腔或胰膽管內注射化學試劑的方法。但受所用大鼠種類、化學藥物的因素影響，通常所複製的慢性胰腺炎動物模型是有差異的，導致形成慢性胰腺炎的機制也有很大區別。諸如食物誘導法所用的WBN/Kob大鼠本身有TGF-β的高表達，富含蛋白質、脂肪的特殊飼料能進一步促進胰腺纖維化；靜脈注射DBTC可能通過藥物引起大鼠膽管上皮細胞損傷，壞死的上皮細胞聚集造成胰膽管的阻塞，先出現急性間質性胰腺炎，以後成為慢性病程，最後形成纖維化；而腹腔內注射雨蛙肽和TGF-β則是在雨蛙肽反覆引起急性水腫型胰腺炎的基礎上，TGF-β加重了胰腺炎的纖維化進程；腹腔內注射二乙基二硫代氨基甲酸鈉(Diethy Mithiocarbamate, DDC)和超氧化物歧化酶(SOD)產生抑制，通過反覆的氧化刺激胰腺，在2～3周內導致胰腺產生纖維化；胰膽管內注射三硝基苯磺酸(Trinitrobenenze sulfonic acid, TNBS)激活胰腺星狀細胞引起了胰腺的纖維化。

應用：疾病模型

模型評價 監測大鼠進食量、體質量： 大鼠一般情況：記錄大鼠平均食物攝人量、體質量。與空白對照組比較，模型組大鼠精神萎靡，毛髮光澤度差，進食減少，排便次數多，大便稀爛。

組織病理學 胰腺病理觀察 常規切片，HE染色。參考Matsumura等評分系統進行評分。 胰腺病理變化：模型組第1天可見胰腺略有腫脹，第3天腫脹充血明顯，胰管稍有擴張，可見囊腫初步形成，第7天囊腫逐漸增大，胰腺與周圍組織有粘連。第14天可見有部分巨大囊腫形成，胰腺開始萎縮並有結節形成。第28天時胰腺萎縮、顏色變白、結節較前更加明顯，部分胰腺囊腫合併感染。 鏡下見模型組大鼠第1天胰腺水腫、間質增寬、大量炎性細胞浸潤，部分腺泡壞死，第3天見腺泡萎縮，有成纖維細胞增生，腺泡細胞周纖維組織形成，炎性細胞浸潤，第7天腺泡周圍有纖維化。第14天除炎性細胞浸潤及腺泡周圍纖維化，可見小葉間及導管周圍纖維化，第28天胰腺明顯纖維化。

標誌因子水平 澱粉酶、蛋白質及羥脯氨酸含量的測定 胰腺澱粉酶、蛋白含量、羥脯氨酸表達測定：採用鹼水解法檢測胰腺羥脯氨酸含量。BCA法檢測胰腺蛋白質含量。 ELISA方法檢測胰腺澱粉酶含量。 胰腺組織蛋白、澱粉酶、羥脯氨酸表達含量變化：模型組大鼠胰腺蛋白質、澱粉酶含量逐漸降低，羥脯氨酸含量逐漸升高