SUI大鼠模型的建模方法

2020-11-12 雲克隆

來源:機械擴張產後大鼠的陰道和結紮雙側陰神經法導致盆底功能受損

模式動物品系:SPF級SD大鼠,孕鼠,雌性,體重為290~350g。

實驗分組:實驗分六組:正常對照組、模型組、陽性藥組、受試藥組三個劑量組

實驗周期:8 weeks

建模方法:構建壓力尿失禁(盆底功能受損的大鼠模型) 建模:機械擴張產後大鼠的陰道和結紮雙側陰神經,創建模擬人分娩的動物模型。 造模方法:雌性Wistar大鼠,12周齡,體重 290~300 g,成年雄性大鼠,體重 290~300 g,分別適應性飼養1W後按照2:1進行合籠。合籠1d後驗陰道栓,取出見栓大鼠單獨飼養,約2w後,取出有孕雌鼠,待初次生產後 1 d,隨機分為2組,對照組,模型組。 Ⅰ 組為對照組; Ⅱ 組為陰道擴張組,模擬產傷 1.1陰道擴張:水合氯醛腹腔內注射麻醉,將8F Foley導尿管(一次性的帶球囊導尿管)頭端置入大鼠陰道,用注射器抽取 5 mL 生理鹽水,部分注入氣囊,觀察大鼠恥骨聯合上方是否有氣囊鼓起,從陰道和恥骨聯合上方調整導尿管插入深度,確認其卡壓於恥骨聯合處時,將 5 mL鹽水充分注入導管,尾端懸系150 mg 重物,將大鼠置於水平桌面,使其恥骨聯合與桌緣相切(懸吊時注意避免導管觸及桌面,牽引過程中保持滑輪與陰道等高,可使牽引力完全作用於陰道壁,從而造成對陰道周圍組織包括盆底和尿道周圍組織的均勻受力),維持該狀態4 h後緩慢放掉水囊,沿陰道外口注入少量無菌生理鹽水後拔除尿管,用該方法模擬分娩時第二產程延長,胎兒對盆底產生長時間壓迫。 1.2離斷雙側陰神經:將雌鼠麻醉固定後,取背側中線皮膚切口和雙側背部肌肉切口,在顯微鏡下於坐骨直腸窩處識別,分離陰部神經,用微創手術鉗分別在雙側陰部神經近閉孔肌分支處各離斷0.3~0.5 cm,然後閉合創口。術後均預防性應用抗生素,建立大鼠雙側陰部神經離斷模型。對照組使用同樣方法進行假手術但不行雙側陰部神經離斷。

應用:疾病模型

模型評價: 噴嚏實驗:尿道口用碘伏消毒,將塗有石蠟油的硬膜外導 管經尿道插入膀胱,置入約 2 ~3 cm。排空大鼠膀胱後,注射器與硬膜外導管相連,通過注射器緩慢向膀 胱內注入美蘭染色的無菌生理鹽水,至尿道外口有藍色液體溢出時記錄最大膀胱容量。再次排空膀胱後注入最大膀胱容量一半的美藍染色無菌生理鹽水,剪取一段鼠須,伸入大鼠鼻孔內致其出現噴嚏反射。仔細觀察大鼠尿道口,有藍色液體從尿道口流出為噴嚏實驗陽性,無藍色液體從尿道口流出則為陰性,計算噴嚏實驗陽性大鼠例數。

組織病理學: 檢測:使用斷頸法處死大鼠,延長腹中線切口 後在底部兩側分別各行一橫向切口,暴露皮下組織後,鈍性分離脂肪和組織可見恥骨聯合。用剪刀剪開恥骨聯合後,暴露膀胱頸和尿道上中段,整塊取出尿道和陰道前壁組織。 病理檢測:HE染色、Masson染色、CD31(免疫組化)。

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