ELISA設置陰性、陽性、空白對照實驗結果有效性

　　

 

　　什麼是「有效性」(Validity)?要獲得準確的檢測結果「有效性」評價，就會關係到：為什麼要設置「陰性、陽性和空白」等不可缺少的三項對照?要用什麼樣的物質擔當「陰性、陽性和空白對照(品)」?這「三項對照」如何設置、需要設置幾個孔位?獲得的測定值如何「認可、取捨與計算」?隨後，又如何依照陽性對照均值(PCx)與陰性對照均值(NCx)的差值(P-N，或N-P)大小做出「試驗結果有效性」的最終裁決呢?…等等，這一連串的問題，在國外「正規」品牌的ELISA試劑《使用說明書》中都有明細和詳盡的說明。既有理論要點提示，又有具體細緻的舉例解說。很可惜，在90年前後，國內興起ELISA檢測熱潮之際，在一片「國外試劑說明書太詳細、太複雜、不容易看明白、…」等等「一片埋冤」聲中，正好迎合國內商家的「意願」。從此以後，國產ELISA試劑的說明書，越來越簡單。這其中商家就有兩個「好處」：好處之一，用A4、或B5，甚至比B5還要小的一張紙，代替國際試劑的好幾頁的「使用說明書」(等同於一份「操作手冊」)，每年就可節省一大筆印刷成本費;好處之二，如同國際試劑說明書上向用戶交待的各種表明本試劑質量有關的詳盡內容，國產試劑的所謂「說明書」上統統可以「刪除、迴避、拒絕」向用戶通報和承諾。我90年前後收集的<美>雅培、<法>巴斯德、<荷>阿克蘇等相關試劑的原文說明書，幾經搬動全都處理，很是可惜。近日，杭州檢疫局朋友送了一份生物梅裡埃中國有限公司的中文版《人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒(酶聯免疫法)使用說明書》。對照閱讀之下，深深感到這才是一份真正意義上的《使用說明書》呀!在我下文提到的若干「概念、問題」，從中都可以找到答案。我現在參照我本人1993年的《肝炎ELISA試劑質量與檢測結果有效性評價》會議講稿相關內容，就「三項對照與檢測結果有效性」表示如下認識和討論。二.三項對照要求與用途ELISA檢測，按照試劑說明書要求，每次試驗、每塊扳上都要設置以下3項對照和用途： 5ZJ8Yh>

　　1.空白對照：僅用稀釋液代替檢測樣本、用以觀測最終反應的顯色「本底」、並用於酶標儀消除、扣除「本底」，即：以本底為「零」讀取陽性、陰性對照孔和樣本檢測孔的吸光值(A);或者，在計算陰性對照均值(NCx)、陽性對照均值(PCx)、樣本讀數的S/C.O.值時減去空白對照的本底吸光值。早年的酶標儀無自動扣除空白對照孔讀數功能，這種酶標議現已淘汰不用了，寫上這段話的意思是補充說明設置空白對照的用途。空白孔具體如何讀取讀數，則依照說明書操作。例如，生物梅裡埃中國有限公司的中文版《人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒(酶聯免疫法)使用說明書》上提示：以空氣讀空白(不放板架和板條)，在450nm(單波長)、或450nm和620—700mn(底物是TMB)參考波長進行讀數。

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