乙酸鈉(0.3mol/L,pH5.2)在DNA和RNA的常規沉澱中最為常用

2020-12-03 網絡虹橋一姐

可以利用這個差異在高濃度LiCl(0.8mol/L)中純化大分子RNA。氯化鈉(0.2molL)可用於DNA樣品中存在SDS時。這種去汙劑在70%乙醇中仍為可溶。

乙酸鈉(0.3mol/L，pH5.2)在DNA和RNA的常規沉澱中最為常用。與通常認為的不同，低溫可抑制DNA的沉澱生成，室溫條件下發生沉澱的效率較大,而不是- 20C或者-80C (Zeugin and Hartley 1985)。

最小反應時間取決於DNA的長度和濃度，長度越短、濃度越低的DNA分子沉澱需要進行更長的時間。針對小片段和低濃度的DNA分子，推薦4C過夜反應。為在延長的低溫保存期中抑制形成鹽沉澱物，最好使用乙酸銨(終濃度500m mol/L)而不是乙酸鈉用於平衡離子(Zeugin and Hartley 1982)。

在4'C且沒有載體存在的情況下，即使濃度低至20ng/mL的DNA也能形成沉澱，並可在微型離心管中通過離心定量地加以回收。

然而在沉澱低濃度的DNA為很小的片段(長度<100核苷酸)時，則需延長離心時間，使核酸沉澱更緊密地結合在離心管上。在沒有載體存在的情況下，於100 000g離心20~30min可回收到皮克級的核酸。

在處理少量DNA時，一種謹慎的做法是留下每- - 步操作中含乙醇的上清液，直到把所有DNA回收回來。在用70%乙醇洗滌DNA沉澱時這種留樣的做法尤為重要，因為在洗滌過程中往往使管壁上的DNA變鬆散。

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