來源:丁香園論壇 2006-12-30 23:21
問:在培養細胞取材做其他檢測時,為了各個培養瓶中的細胞的齊同性,常須通過同步而實現。具體方法不明,好象是用維持培養液(含較低濃度培養血清),而不是用生長培養液。
答:1.細胞同步化是指為研究細胞周期的不同階段的生化特徵,必須獲得細胞周期一致性的細胞.因此,你首先看看是否需要用同步化的細胞
2.細胞同步化分為自然同步化和人工同步化二種方法,前者由於細胞群體受多種條件限制,對結果有很大影響,所以一般都採取後者.
3.常用的人工同步化法分為誘導同步化,選擇同步化或兩者結合.
1):誘導同步化法:
a.胸腺嘧啶阻斷技術,先高濃度胸腺嘧啶培養細胞,使細胞不能通過S期,再改變其濃度,解除抑制,所有細胞都開始DNA合成,即獲得同步化細胞.
b.中期阻斷法,常用秋水仙素來抑制微管聚合,將細胞阻斷在有絲分裂中期.此法不常用.
2)選擇同步化法:
a有絲分裂選擇法,這種方法主要是根據細胞周期的不同階段的生理變化設計的方法.主要特點是可以獲得一定數量的M期的同步化細胞,不受藥物影響,同步化高,但獲得細胞數量少,步驟多,且只能是在貼壁細胞中可以用.
b 細胞沉降分離法,主要用於懸浮細胞,其理論依據是細胞周期不同階段的細胞體積不同.因為細胞在某一離心力場中的沉降速度與其半徑的平方成正比.
用維持培養液(含較低濃度培養血清)可不是用來獲得同步化細胞的哦!
問:用MTT法間接反映細胞增殖活性,是否需要細胞的同步化處理?
答1:如果你做的實驗中幹預因素是促進細胞生長的,我認為是需要做無血清或0.5%濃度血清(有些細胞無血清生長不好)同步化的;如果你做的實驗中幹預因素是抑制細胞生長的,那細胞無血清同步化就可以不是太嚴格要求。
但是儘可能使每組實驗細胞處於G0期,或者在同一生長周期,這對於實驗結果的可信度和可重複性是十分有好處的。
答2:作MTT時需要設定對照組,其他各組都分別和對照組比較,所以無需同步化。
答3 :不需要的,因為已經有對照了。同步化反而加入了一個周期的幹擾因素,不能反映生理狀況了。
個人覺得不需要同步化,預實驗時做過同步化,測出來的OD值都低於0.2,同步化是為了使細胞處於同一周期,而MTT與細胞周期沒有關係
問:提取細胞蛋白時候,如果不進行血清飢餓同步化,有什麼後果?
答:我覺得組間的蛋白表達量將無法比較,因為可能是由於血清刺激而導致表達量的不同吧
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