最全的各種細胞計數方法總結,趕緊收藏

隨著醫學檢驗技術的不斷發展，曾經每個檢驗人必須掌握的各類細胞手工計數方法都被各種儀器所替代了，現在醫院檢驗科年輕點的同志可能都不知道紅細胞、白細胞等手工計數的方法了。可能年輕人不服氣了說，現在都有儀器來做哪還需要掌握這個？No，No，No，小編告訴大家，其實掌握這些其實非常實用的，先進的儀器固然能為我們及時快速的提供檢驗結果，但是當儀器對細胞計數分類出現異常時，手工顯微鏡檢查就顯的尤為重要。大家可以通過每年檢驗職稱考試都會出現這種類型的題目就會發現。現在小編給大家總結下各類細胞的手工計數原理及方法，供大家參考。

一、紅細胞計數

1.原理：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數，充入血細胞計數池，計數一定體積內的紅細胞，經換算求出每升血液中紅細胞數量。

2.操作：

1）取中號試管1支,加紅細胞稱釋液2.0ml

2）用清潔乾燥微量吸管取末梢血10μl,擦去管外餘血後加至紅細胞稀釋液底部,再輕吸上層清洗吸管2-3次立即混勻。

3）混勻後,用乾淨微量吸管將紅細胞懸液充人計數池,不得有空泡或外溢,充池後靜置2-3min後計數

4）高倍鏡下依次計數中央大方格內四角和正中共5個中方格內的紅細胞。對壓線細胞按「數上不數下、數左不數右」的原則進行計數。

3.計算：

紅細胞數/L=5個中方格內紅細胞數×5×10×200×106

=5個中方格內紅細胞數×1010

=5個中方格內紅細胞數÷100×1012

公式中：

×5     5個中方格換算成1個大方格；

×10    1個大方格容積為0.1μl，換算成1.0μl；

×200   血液的實際稀釋倍數應為201倍，按200是便於計算；

×106    由1μl換算成1L。

二、白細胞計數

1.原理：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數，充入血細胞計數池，計數一定體積內的白細胞，經換算求出每升血液中紅細胞數量。

2.方法 

1）取小試管1支，加白細胞稀釋液0.38ml。

2）用微量吸管準確吸取血樣20μl，擦去管外多餘血液，將吸管插入小試管中稀釋液的底部，輕輕將血放出，並吸取上清液清洗吸管兩次，混勻。

3）待紅細胞完全被破壞，再次混勻後，用微量吸管吸取混勻液10μl充池，靜置2-3分鐘，待白細胞下沉。

4）用低倍鏡計數四角大方格內的白細胞數，對壓線細胞按「數上不數下、數左不數右」的原則進行計數。

3.計算：白細胞數/L =N/4×10×20×106 =N/20×109

公式中：

    N     4個大方格中白細胞的總數 

   ÷4    為每個大方格（即0.1μl）內白細胞平均數

   ×10   1個大方格容積為0.1μl，換算為1.0μl    

   ×20   血液稀釋倍數 

   106    由1μl換算成1L

4.一些貧血患者血液中有核紅細胞增多，會計數在白細胞總數內，應校正。

校正公式：白細胞校正數/L=M×（100/100+N）

M位未校正前白細胞數，N未在白細胞分類時，計數100個白細胞的同時計數到的有核紅細胞數

三、血小板計數

1.原理：將血液用適當的稀釋液作一定量稀釋後，混勻注入計數池內計數，再算出每升血液中血小板數。

2.方法：

1）小試管內加血小板稀釋液0.4ml。取動物靜脈血20mm3，迅速擠於稀釋液內，立即充分搖勻。

2）放置4-10min，待溶液呈透明紅色，說明紅細胞已經充分溶解，充分搖勻，取1小滴加入計數池。

3）放置10-15min，待血小板完全下沉後，先將中央大方格移至低倍鏡視野內，再轉以高倍鏡，數5個中方格內的血小板數。

4）血小板大小形態不一致，但均呈折光的發亮淡藍色小點，大小約紅細胞的1/7-1/2，呈不規則圓形或長圓形。在計數時必須來回扭動顯微鏡微調，不要遺漏計數。

3.計算：

5個中方格血小板總和×1/50mm3(5個中方格的體積)×1/20(稀釋倍數)=1/1 000mm3。故5個中方格的總和×1000=lmm3血液的血小板數。

PLT/L=5個中方格內PLT （N）×109/L=N×5×10×20×106 /L

公式中：

    N     5個中方格中血小板的總數 ；

   ×5     5個中方格換算成1個大方格；

   ×10   1個大方格容積為0.1μl，換算為1.0μl    

   ×20   血液稀釋倍數 

   106    由1μl換算成1L

四、網織紅細胞計數

1.原理:

網織紅細胞是未完全成熟的紅細胞,包體較一般紅細胞稍大,胞漿中尚有嗜鹼性殘存物質,可被煌焦油藍等染成藍色顆粒狀和線狀及網狀結構物。網織紅細胞的數量可用百分率或每立方毫米血液中的絕對值數來表示。

2.方法

1）血膜片製備:

2）染色:取試管一支,用毛細管或槍頭於試管中加入染液2~5滴,然後再加入新鮮血液1滴輕搖混合,染色10~15min。

3）製片:取載物片一片,用毛細管或槍頭吸取血液染色液1小滴於載物片上,並用推片約45度角推製成舌型血膜片,自然乾燥備用。

4）觀察:用顯微鏡觀察,取血膜片滴入香柏油1滴,將血膜片置於顯微鏡載物臺,用油鏡觀察網織紅細胞

3.計數

取計數器在油鏡下檢查計數紅細胞,即計數紅細胞中網織紅細胞的數量,檢查計數100個紅細胞中網織紅細胞的數量,並得出千分率再除以10即為百分率。

計算公式：網織紅細胞百分率=10/1000個紅細胞中網織紅細胞的數量

五、嗜鹼性點彩紅細胞計數實驗

1.原理

紅細胞中的嗜鹼性物質用瑞氏或美藍染液顯示出紅細胞中的藍色點彩、然後計數點彩紅細胞佔紅細胞總數的百分數。

2.方法

1）用通常的方法製成薄血膜，乾燥後用甲醇固定，

2）用鹼性美益藍染40s水洗，晾乾。

3）用低倍鏡選擇紅細胞分布均勻的部位，然後換油色計數，紅細胞呈強藍色，點彩顆粒呈深藍色．

3、計數方法：

基本與網織紅細胞相同，計數50個視野中的點彩紅細胞同時計數其中5個視野的紅細胞總數，即可算出點彩紅細胞的百分數，如用瑞氏染色其方法同血片染色。

計算公式：點彩紅細胞百分率=10/1000個紅細胞中點彩紅細胞的數量

六、腦脊液（胸腹水）有核細胞計數

1.原理

（1）清亮或微渾的腦脊液（胸腹水）標本，可以直接計數細胞總數，或稀釋後再直接計數，將結果乘以稀釋倍數。

（2）可採用直接計數法計數白細胞，或稀釋後再直接計數，將結果乘以稀釋倍數。

（3）白細胞直接計數後，在高倍鏡下根據白細胞形態特徵進行分類計數。也可採用Wright染色後，油鏡下分類計數。

2.方法

(1)非血性標本:小試管內加入冰醋酸1~2滴,轉動試管,使內壁沾有冰醋酸後傾去,然後滴加混勻腦脊液3（胸腹水）~4滴,數分鐘後,混勻充人計數池,按血液白細胞計數法計數。

(2)混濁或血性標本:將混勻腦脊液（胸腹水）用1%冰醋酸溶液按血液白細胞計數法稀釋後進行計數。

3.計算

為剔除因出血而來的白細胞數,用下式公式進行校正。腦脊液（胸腹水）白細胞校正數=腦脊液（胸腹水）白細胞計數值一出血增加的白細胞數出血增加的白細胞數=外周血白細胞數x腦脊液（胸腹水）紅細胞數/外周血紅細胞數

4.公式

1）澄清標本

按血液白細胞計數法計數換算略麻煩，直接計數5個大方格比較方便，此時

腦脊液（胸腹水）白細胞數/L=N×2×10e6/L=2N×10e6/L

N表示5個大方格內的白細胞總數

×2：5個大方格的容積為0.1×5=0.5ul，換算為1.0ul只需要乘以2；

×10e6：由1.0ul換算為1L；

也可以充兩個計數室，計數10個大方格。

2）渾濁/血性標本

腦脊液（胸腹水）白細胞數/L=N×2×20×10e6/L=40N×10e6/L

×2：將5個大方格的白細胞數換算為1.0ul的白細胞數；

×20：腦脊液（胸腹水）的稀釋倍數；

×10e6：由1ul換算為1L；

也可以充兩個計數室，計數10個大方格。

七、精子計數

1.原理：

將精液用適當的稀釋液作一定量稀釋後，混勻注入計數池內計數，再算出每毫升精液中精子數。

2.方法（按照最新版第四版《全國臨床檢驗操作規程》）

1).於小試管內加精子稀釋液0.38ml,取液化精液20μl,加入稀釋液內混勻。

2).充分搖勻後,滴入改良 Neubauer計數板的計數池內,靜置1~2分鐘,待精子下沉後,以精子頭部作為基準進行計數。

3.計算

1).如每個中央中方格內精子少於10個,應計數所有25個中方格內的精子數。

2).如每個中央中方格內精子在10~40個,應計10個中方格內的精子數。

3).如每個中央中方格內精子多於40個,應計數5個中方格內的精子數。

公式：

精子數=計數結果/計數中方格×25×1/計數池高度×20×103/ml

           =計數結果/計數中方格×1/計數池高度×5×103/ml

下期將推出血氣分析的巧記方法，敬請關注

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