實驗技術篇|如何提高細胞計數的準確性

2021-02-23 一隻旺仔小饅頭

（為毛子國外的教學視頻就這麼的香呢）

        （有人碎碎念問我為毛沒歌了）

講真，在所有的細胞實驗中，最為簡單基礎，但最為操作麻煩，甚至讓你有點崩潰的便是細胞計數額，尤其是一連做七八個對照組的時候！（饅之瘋狂哭泣）

 

這個實驗的簡單之處在於：全程無腦傻瓜操作，所需的材料廉價可得，整個過程中絕對不會涉及到因為試劑的問題影響實驗。全看自己操作的可不可。

 

這個實驗的難點之處在於：每一次細胞的消化，細胞的處理，不同的細胞，甚至細胞混勻之後吹打的問題都會影響實驗計數的結果。後續因為每個細胞的生長狀況不同，所以種細胞的時候還需要按需求來調整所種細胞的量。

今天就來聊聊如何提高細胞計數的準確性啦！

 

有條件的當然是電子細胞計數器啦！

（有錢的金主爸爸們請止步此處，後續的都不用看）

有

錢

人

的

分

割

線


接下來，我們聊點貧民窟科研狗🐶需要掌握的技能！！

每次實驗之前，建議都做一次計數

很多實驗室都有師兄師姐傳承下來的每皿細胞數，師弟師妹們也樂得清閒，一般不計數，只照著原來的計數量。但是每一皿細胞因為生長狀況不同，所作處理不同，消化的時間順序都不同，所以數量也會不同。

所以，為了確保實驗的準確性，爭取每一次之前都計數。(請別打我)

 

   2 細胞計數的時候，儘量數「大格子」 （計數板四個角角的那個）

理論計數的時候，有兩種計算方式。

1）方法一：如圖，圈出來的四個格子，求平均數

2）方法二：如圖，圈出來中間的格子，再求平均數

  實際操作的時候， 提前預估一下細胞的量，細胞濃度太低了誤差大，細胞濃度太大的時候容易數到老眼昏花，頭皮發麻。

一般是圖中所示：1+3+7+9/4   覺得這幾個數值相差比較大的時候你甚至可以數1+2+3+4+5+6+7+8+9/9。總是，基數越大，誤差越小。

總之原則就是，多次多數總沒錯！

3.計數板需要清洗乾淨，蓋玻片確保無殘渣在上面，在操作的時候可用酒精擦拭，待完全風乾並無碎屑之後開始滴細胞液。

4.細胞充分吹打，儘可能使細胞分離成單個。如果是貼壁特別緊的細胞，可以考慮分裝出來，再震蕩機那裡離心。計數前快速吹打均勻，尤其是多次取樣計數時更要注意每次都要混勻，操作儘量迅速。

5.（高端技能，萌新勸退）一般操作順序都是蓋完玻璃片之後側面通過液體毛吸作用到達計數室。高端的技能是：直接滴10U到計數室，再蓋玻璃片。但是實際操作的時候，極容易起氣泡，需要強加練習。

數細胞的原則為只數完整的細胞，若小少量細胞聚集成團，只按照一個細胞計算。如果細胞壓格線上，則只計上線，不計下線，只計右線，不計左線。（重點，重點，重點）

6.如果細胞需要臺盼藍染色，必須充分混勻並且不要忘記計算時乘以倍數。（這裡的倍數一定要搞清楚啊啊啊啊）

7.滴加細胞過程中，滴加後移動計數板以及計數過程中都要保持計數板水平不晃動，防止細胞液體側流帶動細胞流失或者局部聚集.

8.剛開始操作的時候，如果有任何覺得細胞吹打的不到位的，或者說每一個格子計數的數量差別較大的時候，不要猶豫，重複測量。

最後，祝實驗順利，不要禿頭！❤️

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