乾貨 | 細胞手工計數方法簡介

2021-02-23 生物製品圈

首先，計數板需要清洗乾淨，使其乾燥，不能有油脂或者灰塵，蓋玻片亦如此，不乾淨的計數板嚴重影響計數結果的準確性。

其次,提前預估細胞量，細胞濃度太低誤差大，細胞濃度太大容易數花眼。最好使其濃度在0.5-5x106個/mL，也就是每個計數室50-500個細胞，細胞數目過多，則需要進一步稀釋；細胞數目過少，則需要離心再懸浮。

第三，儘可能使細胞分離成單個，無團塊無雜質；計數前快速吹打均勻，尤其是多次取樣計數時更要注意每次都要混勻，操作儘量迅速。

第四，細胞液滴加到計數室再蓋蓋玻片，亦可先蓋玻片，從側面通過液體毛吸作用到達計數室，液體太多容易測流到計數板小溝，細胞容易被流走；液體太少容易在計數室或者附近形成空泡。如出現以上情況，則需準備細胞和計數板重新計數。

第五，數細胞的原則是只數完整的細胞，若少量細胞聚集成團，只按照一個細胞計算；如果細胞壓在格線上，則只計上線，不計下線，只計右線，不計左線。

第六，如果細胞需要臺盼藍染色，必須充分混勻並且不要忘記計算時乘以倍數；

第七，滴加細胞過程中，滴加後移動計數板以及計數過程中都要保持計數板水平不晃動，防止細胞液體側流帶動細胞流失或者局部聚集。

第八，建議細胞計數板上下兩室都計數然後取平均或者多次計數取平均，準確的計數應該是多次計數結果差別很小，或者稀釋一定倍數後計數結果依然吻合。

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