細胞計數

在細胞培養工作中，常需要了解細胞生活狀態和鑑別細胞死活，確定細胞接種濃度和數量以及了解細胞存活率和增殖度，如用酶消化製備的細胞懸液中細胞活力的鑑別，凍存細胞復甦後的活力檢測等。細胞懸液製備後，常用活體染料臺盼藍對細胞進行染色，由於臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色。而死亡細胞的細胞膜通透性增高，可使染料進入細胞內而使細胞著色（藍色）。

而當進行細胞計數時一般用血細胞計數板，同時可以確定細胞的生活狀況。

血球計數板是由一塊比普通載玻片厚的特製玻片製成的，玻片中有四條下凹的槽,構成三個平臺，中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面,刻有一個方格網，方格網上刻有9個大方格,其中只有中間的一個大方格為計數室，供微生物計數用，這一大方格的長和寬各為1mm，深度為0.1mm，其體積為0.1mm3。
計數室通常有兩種規格，一種是大方格內分為16中格，每一中格又分為25小格；另一種是大方格內分為25中格，每一中格又分為16小格，但是不管計數室是哪一種構造，它們都有一個共同的特點，即每一大方格都是由16×25=25×16=400個小方格組成。

用滴管吸取 10 μl細胞懸液（可包含臺盼藍溶液），從計數板邊緣緩緩滴入，使之充滿計數板和蓋片之間的空隙中。注意不要使液體流到旁邊的凹槽中或帶有氣泡，否則要重做。稍候片刻，將計數板放在低倍鏡下（10×10 倍）觀察計數。

計算計數板的四角大方格（每個大方格又分 16 個小方格）內的細胞數。計數時，只計數完整的細胞，若聚成一團的細胞則按一個細胞進行計數。在一個大方格中，如果有細胞位於線上，一般計下線細胞不計上線細胞，計左線細胞不計右線細胞，二次重複計數誤差不應超過 ±5%。

對每個樣本計數三次，取平均值。

計完數後，需換算出每 ml 懸液中的細胞數。

由於每個大方格的懸液體積為0.1mm3，即0.1μl，所以每ml的細胞懸液中的細胞個數等於4個大方格的平均細胞數×10000，如果技術前還進行了稀釋，則還需要再乘稀釋倍數。

向計數板中滴細胞懸液時要乾淨利落，加量要適當，過多易使蓋片漂移，或淹過蓋片則失敗，需重做，過少易出現氣泡。不理想時，應重做。

鏡下計數時，若方格中細胞分布明顯不均，說明細胞懸液混合不均勻，需重新將細胞懸液進行混合，再重新計數。