實驗專欄丨檢測細胞毒性實驗對比

2021-02-13 中洪博元醫學實驗幫

科研工具| 統計分析| 實驗 | SCI寫作 | PPT

很多讀者都會遇到這樣的問題，在檢測貼壁細胞毒性時，不知道該哪種試劑，今天小編就來比較一下這兩種試劑的優劣。

首先我們來看一下CCK8與MTT的實驗原理。

CCK-8實驗：


實驗原理：

全稱為Cell Counting Kit-8，在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被細胞內脫氫酶還原成水溶性的甲臢染料，生成的（橙黃色）甲臢量與活細胞數量成正比，即顏色的深淺與細胞的增值成正比。因此可以用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。 

注意事項：

1、酚紅和血清對CCK-8法的檢測不會造成幹擾，可以通過減去空白孔中本底的吸光度而消除。

2、CCK-8試劑的顏色為淡紅色，與含酚紅的培養基顏色接近，不注意的話容易產生漏加或多加。

3、當在培養箱內培養時，培養板最外一圈的孔容易乾燥揮發，導致體積不準確而增加誤差。一般情況下，最外一圈的孔只加培養基，不作為測定孔用。

4、金屬對CCK-8顯色有影響：終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會5%、15%、90%的抑制顯色反應，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM，將會100%抑制顯色反應。

5、部分懸浮細胞由於染色比較困難，一般需要增加細胞數量並延長培養時間。

（圖為MTT實驗，圖為本公司實驗圖，勿盜）

MTT實驗法：


實驗原理：

全稱為 3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍，是一種接受氫離子的黃顏色染料，可作用於活細胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下tetrazolium環開裂，生成藍色的formazan結晶，formazan結晶的生成量僅與活細胞數目成正比(死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原)。還原生成的formazan結晶可在含50%的N，N-二甲基甲醯胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數目。也可以用DMSO來溶解。

注意事項：

1、在用酶標儀檢測結果的時候，為了保證實驗結果的線性，MTT 吸光度最好在0-0.7 範圍內。

2、MTT一般最好現用現配，過濾後4℃避光保存兩周內有效，或配製成5mg/ml保存在-20℃長期保存，避免反覆凍融

3、避免血清幹擾：一般選小於10%的胎牛血清的培養液進行試驗。在呈色後儘量吸盡孔內殘餘培養液。

4、設空白對照：與試驗平行不加細胞只加培養液的空白對照。其他試驗步驟保持一致，最後比色以空白調零。

5、MTT檢測細胞活性的操作方法

更多精彩內容掃描下方二維碼，實驗諮詢微信zhbybio

相關焦點

  • 實驗專欄丨石蠟切片和冰凍切片——傻傻分不清楚
    科研工具| 統計分析| 實驗 | SCI寫作 | PPT在組織實驗中，石蠟切片和冰凍切片是最常見的兩種切片方法，兩種優缺點明顯，在實驗的應用上也大有不同。而兩個實驗的相同點都是應用免疫學基本原理——即抗原與抗體特異性結合的原理，通過化學反應使標記抗體的顯色劑顯色來確定組織細胞內蛋白質，對其進行定位、定性及相對定量的研究。
  • 實驗專欄丨細胞生長緩慢,怎麼破?
    （B）由於支原體汙染不容易覺察到，因此必須定期檢測（C）檢測可能汙染的途徑和原因2.檢查你用於培養細胞的培養基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規使用的是粉劑或10X儲存液，而現在購買的培養基更換為1X液體，而隨後證明問題就出自於此，處理方法請參見下則分享內容。
  • 【實驗專欄】蛋白檢測篇之GST pull-down
    開設實驗專欄意在為科研人員提供熱門的生物醫藥實驗方法參考,為科研愛好者實驗提供一些相關性參考,以及實驗經驗，以幫助他們更加高效的完成實驗。專欄主要分為基因操作工具、細胞實驗部分、動物模型部分、組織水平部分、分子機制部分和實驗方案範例六大專題。接下來將為大家分享分子機制部分的蛋白檢測篇之GST pull-down。
  • 實驗專欄丨成骨細胞誘導實驗細節曝光,先睹為快!
    科研工具丨作圖丨實驗丨SCI丨統計分析丨國自然培養器皿表面的明膠包被：為了避免誘導過程中MSCs出現漂浮現象，建議對成骨誘導使用的培養器皿表面進行明膠包被。4、30 min後棄去明膠，待培養器皿晾乾後，即可用於接種細胞。另：包被明膠的培養器皿在無菌和明膠不蒸乾的條件下，可以在4℃保存兩周。
  • CCK8細胞增值檢測實驗簡介
    全心全意就為醫生服務，一心一意只為造福醫生    CCK-8（Cell Counting Kit-8）細胞活性和增殖檢測是醫學研究中常用的實驗技術
  • 實驗專欄丨SmaterRace新技術,一起get
    cDNA末端快速擴增技術(rapid amplification of cDNA ends, RACE)是基於PCR技術由已知的部分cDNA序列來獲得完整的cDNA全長序列的一種實驗方法，該技術由Frohman等人在1988年首次提出。
  • MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒操作說明書
    MTT 細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒操作說明書 中國教育裝備採購網 2015/7/14 14:
  • CCK8細胞增殖與毒性檢測試劑的應用
    來源：ChemicalBook背景及概述[1]CCK-8法使用方便，省去了洗滌細胞，並且檢測快速，靈敏度高，重複性優於MTr法，對細胞毒性小。CellCountingKit-8（CCK-8試劑盒）是由日本同仁化學研究所（Dojindo）開發的檢測細胞增殖、細胞毒性的試劑盒，為MTT法的替代方法，試劑盒中採用自己開發的水溶性四唑鹽-WST-8，在日本，美國，歐洲等國家地區均持有專利，同仁化學研究所於2006年在中國獲得了WST-8的註冊商標。
  • 實驗專欄丨大神教你如何細胞計數
    科研工具| 作圖| 實驗 | SCI |統計分析細胞培養技術中，細胞計數是一項基本功，對於標準化培養條件以及需要精確定量的實驗來說都非常關鍵。這裡介紹使用血細胞計數器對細胞進行計數的經典方法以及中間一些需要注意的細節。對於貼壁生長的細胞，我們需要首先使用胰酶消化的方法使細胞從培養皿表面脫落根據需要加入合適體積的培養基，將細胞進行中和及稀釋，以得到均質的細胞懸液。
  • 實驗專欄丨手把手教你質粒轉染
    細胞轉染是指將外源分子如DNA，RNA等導入真核細胞的技術。常規轉染技術可分為瞬時轉染和穩定轉染（永久轉染）兩大類。本實驗室主要是質粒轉染、miRcroRNA轉染、慢病毒轉染、藥物轉染、多肽轉染等。六孔板、CO2培養箱、EP管、酒精燈等；無血清培養基、MEM-α或DMEM、CO2培養箱、EP管、質粒、細胞等1當六孔板中細胞密度達90％時，準備轉染，將無血清培養基、MEM-α或DMEM取出復溫並注意平衡好（以六孔板為例，其他孔板都可以按照說明書進行）；2取出細胞，將培養基換成無血清培養基，放回孵箱培養；3取滅菌的EP管
  • 細胞凋亡檢測——萬融實驗
    細胞凋亡有別於細胞壞死，它有一系列的細胞形態學和生物化學的改變，包括出現染色質濃縮、DNA降解、凋亡小體形成等。Annexin－Ⅴ－FITC單染法【實驗原理】正常活細胞的磷脂醯絲氨酸（phosphotidylserine，PS）位於細胞膜的內側，而凋亡細胞的PS從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。
  • 實驗專欄丨如何建立大鼠體外循環模型?
    科研工具丨作圖丨實驗丨SCI丨統計分析丨國自然體外循環(cardiopulmonary bypass
  • 細胞實驗步驟分享
    最近一直在做細胞實驗，逛論壇發現很多人在細胞實驗中常遇到：細胞凍存後很難復甦，或者復甦後出現大量死亡細胞。細胞的狀態直接影響後續的實驗，以下從細胞復甦、細胞凍存和細胞超低溫冰箱存儲，三個方面分享我們實驗室的方法，不敢說權威，但真的總結了自己多年來的一些經驗教訓，供大家參考：細胞復甦1）75％酒精擦拭超淨工作檯，放置已消毒的培養瓶、吸管等，紫外線照射20min；
  • MTT實驗測定細胞增殖詳細操作手冊
    MTT比色法，是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢[jiǎ zā]（Formazan）並沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞碸（DMSO）能溶解細胞中的甲臢，用酶聯免疫檢測儀在570 nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。在一定細胞數範圍內，MTT結晶形成的量與細胞數成正比。
  • CCK8檢測操作手冊免費送——實驗外包
    它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產物（Formazan dye）。生成的甲瓚物的數量與活細胞的數量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。96 孔板、CO2培養箱、酒精燈、移液槍、酶標儀等；細胞、CCK8等。
  • 實驗專欄丨小鼠腹腔注射,我為什麼總是打不進或出血?
    科研工具丨作圖丨實驗丨SCI丨統計分析丨國自然對新開發藥物療效的研究當中，靜脈注射和腹腔注射是最常見的兩種給藥途徑。而小鼠尾靜脈注射對初學者來說，可能有一定難度，但注射是否成功容易判斷，不會對實驗結果造成影響。而腹腔注射雖然看似簡單，但如果我們沒有掌握注射技巧，常常會遇到液體流出或者內臟出血，導致實驗越來越糟糕。那麼在腹腔注射的實驗中，我們該掌握哪些注射手法和技巧呢，下面就一起來看看。①抓取小鼠，使其腹部朝上頭部略向下垂
  • 實驗 細胞汙染後,你該做的那些事兒
    器材或者溶液很久沒有，未檢測是否汙染直接使用；離心管多次使用，搶頭為圖方便交叉使用。3. 超淨臺不點酒精燈；點了酒精燈放在右上角，而你在左下角做試驗（和沒點也沒差！）4. 不帶手套，徒手操作。雖然你用洗手液洗了好幾次，還直接往手上噴75%乙醇，也真是膽大，長久以往手上的皮膚肯定會被燒傷。
  • 想發SCI,這些常規細胞實驗一定要知道
    但作為一個科研小白，在面對細胞實驗時總是束手無策，所以我整理了常規細胞實驗技術，以供大家參考。  1. MTT法：是一種檢測細胞存活和生長的方法。該方法已廣泛用於生物活性因子的活性檢測、抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經濟、快捷。
  • 「實驗」細胞增殖—培養細胞增殖動力學檢測
    一、實驗目的1.了解細胞增殖動力學的主要指標。2.掌握細胞增殖動力學的檢測方法。3.掌握MTT法檢測細胞增殖的工作原理。二、實驗原理有絲分裂指數和生長曲線是細胞增殖動力學的主要指標。有絲分裂指數是指處於分裂期的細胞數佔細胞總數的百分比。MTT法的原理是活細胞 線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲臢(Zā)並沉澱在細胞中，而死細胞則無此功能。DMSO能溶解細胞中的甲臢(Zā)，用酶連檢測儀在490nm處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數量。三、試劑與器材1.材料：LN299人膠質瘤細胞系。
  • 細胞毒性T淋巴細胞的作用和研究
    細胞毒性T淋巴細胞（CTL，cytotoxic T lymphocyte），又稱殺傷性T淋巴細胞，是正常人體細胞免疫的主要效應細胞，也是腫瘤免疫過繼療法主要效應細胞之一，專門分泌各種細胞因子參與免疫作用。對某些病毒、腫瘤細胞等抗原物質具有殺傷作用，與自然殺傷細胞構成機體抗病毒、抗腫瘤免疫的重要防線。