關於免疫共沉澱實驗不得不說的那些事(文末有福利)

2021-02-13 四正柏

1. 細胞裂解採用溫和的裂解條件，不能破壞細胞內存在的所有蛋白質-蛋白質相互作用或抗原的結構，多採用非離子變性劑(NP40 或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的，通過經驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS)，細胞裂解液中要加各種酶抑制劑，如商品化的cooktail。

2. 使用對照抗體:

單克隆抗體:正常小鼠的IgG或另一類單抗

兔多克隆抗體:正常兔IgG

3. 要確保抗體的特異性，即在不表達抗原的細胞溶解物中添加抗體後不會引起共沉澱。

4.確定蛋白間的相互作用是發生在細胞中，而不是由於細胞的溶解才發生的，這需要進行蛋白質的定位來確定。

 

早期的產品 beads 是採用瓊脂糖做成的微球，通過離心沉澱到管底，因顆粒小容易被攪動起來，因此在洗滌的步驟移液動作要非常小心，不能吸走了 beads 也不能殘留太多的液體，否則靶蛋白有損失或者殘留液體可能導致假陽性信號。逐漸新的材質磁性 beads 就誕生了，磁珠採用磁力架沉澱，沉澱清洗方便又快速，所以越來越多的實驗室採用 Co-IP 磁珠。

 

4ABio Beads Protein A，一種具有超強吸附力、高效而有簡便的IgG提純方法。

優點：

1. 簡化了小規模純化的樣品處理，無需離心

2. 高純度和高產量，相比離心法，磁體吸附法更能避免殘留裂解液導致的假陽       性，最大產量為6 mg 人 IgG/ml 磁珠懸液

3.  輕鬆地平行篩選抗體，具有高度重現性

4. 應用於多種規模抗體純化（低至微升，高至毫升規模）

5. 操作快捷

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