導讀
胰腺腫瘤細胞釋放含有脂質、蛋白質、RNA和DNA分子的細胞外囊泡(sEVs、外泌體)，可能促進轉移的形成。目前還不清楚這些囊泡中含有什麼物質以及如何釋放。蛋白激酶D1 (PRKD1)抑制細胞運動，被認為在胰腺導管腺癌(PDACs)中失調。所以本研究作者探討了它是否調節胰腺癌細胞中sEVs的產生以及它們在小鼠胰腺癌細胞中形成轉移前小生境的能力。結果發現與非腫瘤組織相比，人PDAC組織中PRKD1的水平降低。與KC小鼠相比，PRKD1KO-KC小鼠發生胰腺上皮內瘤變的速度更快，肺轉移灶更多，平均存活時間明顯縮短。PRKD1減少了其底物皮質激素的磷酸化，導致質膜上的F-肌動蛋白水平升高。與表達PRKD1的胰腺細胞的sEV相比，來自PRKD1缺失或表達降低的細胞的sEV的含量發生了變化，並且將這些sEV注入小鼠體內會增加異種移植瘤向肺的轉移。
論文ID
題目：Protein Kinase D1, Reduced in Human Pancreatic Tumors, Increases Secretion of Small Extracellular Vesicles From Cancer Cells That Promote Metastasis to Lung in
Mice
譯名：蛋白激酶D1，在人類胰腺腫瘤中減少，增加了癌細胞中小細胞外囊泡的分泌，從而促進了小鼠向肺的轉移
期刊：Gastroenterology
IF：19.233
發表時間：2020.5.13
通訊作者單位：烏爾姆大學醫院
DOI號：https://doi.org/10.1053/j.gastro.2020.05.052
研究內容
作者首先使用ualcan分析各種腫瘤和健康組織中prkd1的表達，發現PDAC、LUAD和BRCA中prkd1的表達降低。作為腫瘤中Prkd1下調的可能原因，Prkd1啟動子甲基化也顯著增加。為了定義體內PDAC中PRKD1表達降低的潛在生物學作用，作者在致癌性KRasG12D背景（Prkd1KOKC）中產生了胰腺特異性Prkd1基因敲除小鼠。通過分析與KC和p48- crek -Prkd1-/- (Prkd1KO)組(5個月和9個月)相比，Prkd1基因敲除增加了5個月大的PanINs和腫瘤的數量，並加速了腫瘤的形成。結果說明prkd1缺失加速胰腺腫瘤的發生。
圖一：prkd1缺失加速胰腺腫瘤的發生
為了探索在人類細胞中Prkd1缺失的後果，作者用CRISPR-Cas9去除Panc1細胞中的Prkd1、-2和-3。微陣列基因表達分析顯示，與親代細胞(Panc1)相比，Prkd1Crispr中有4905個顯著調控探針。對細胞成分進行的FunRich3.13非加權分析（http://funrich.org）經過優化，可用於分析涉及分子運輸過程和sEV分泌的基因特徵，發現與「細胞外水泡囊泡」相關的基因顯著富集了13.7％。為了研究Panc1和Prkd1Crispr細胞中sEV的分泌，作者採用了最低實驗要求標準（MISEV）。採用流式細胞術檢測sEV表面標記物cd6338。結果發現，與親代對照相比，Prkd1Crispr細胞釋放的cd63陽性的sEVs顯著增加。異位重新表達PRKD1顯著降低CD63信號水平，幾乎達到親代水平。為了確定sEVs的大小分布和濃度，作者進行了納米顆粒跟蹤分析(NTA)，其中Panc1和prkd1crispr衍生的sEVs的平均模式大小分別為140和146 nm。引人注目的是，Prkd1Crispr細胞提取的樣本顯示，sEV濃度增加了4.6倍
圖二：prkd1敲除以一種亞型特異性的方式增強sEV的分泌
Prkd1Crispr和Panc1細胞的基因表達分析發現了與「受體細胞中ev介導的信號轉導」相關的特徵，提示Prkd1Crisprderived sEVs可能在體外改變PDAC細胞的侵襲性。prkd1 -敲除增強了PDAC細胞系的侵襲性。同樣，半穩定的prkd1耗損的Panc1細胞也表現出更高的侵襲性。Panc1細胞對親代和prkd1crispr來源的sEV的吸收無顯著差異。因此，當prkd1缺失時，sEVs的生物學行為發生改變，改變腫瘤微環境(TME)中的局部自分泌信號，促進腫瘤細胞侵襲。
圖三：prkd1缺失後肺轉移和sEV分泌的分子調控
總結
與非腫瘤胰腺組織相比，人PDAC的PRKD1水平降低。 PRKD1的缺失導致胰腺癌細胞系中cortactin的磷酸化降低，從而導致質膜上F-actin的增加和sEV的釋放增加，其含量也發生了變化。 這些sEV促進小鼠異種移植和胰腺腫瘤向肺的轉移。因此，新的方法，如選擇性靶向PDAC中PRKD1表觀沉默，可能至少在某些方面解決該腫瘤的早期侵襲和轉移。
原文連結
https://doi.org/10.1053/j.gastro.2020.05.052
參考文獻
1. Oettle H, Neuhaus P, Hochhaus A, et al. Adjuvant chemotherapy with gemcitabine and longterm outcomes among patients with resected pancreatic cancer: the CONKO-001 randomized trial. JAMA 2013; 310:1473-81.
2. Perkhofer L, Ettrich TJ, Seufferlein T. Pancreatic Cancer: Progress in Systemic Therapy. Gastrointest Tumors 2014; 1:167-79.
調控性非編碼RNA與外泌體研究策略與課題設計網絡班
（兩天集中培訓 ，時間：6.20-21 ，醫藥加zoom會議室）
為幫助非編碼RNA與外泌體研究的科研人員掌握本領域的研究套路與常用技能， 考慮目前在疫情期間的實際情況，我們決定召開【非編碼RNA與外泌體研究策略與課題設計網絡實戰精講班】，為了保證學習效果，我們採用國際頂級的zoom網絡會議平臺授課，效果體驗好！
課程可免費回放，專家微信群指導，確保你能學會！
非編碼RNA（non-coding RNA，ncRNA）研究是當今生命科學領域發展最迅速的前沿領域之一。非編碼RNA在生命調控過程中扮演著重要角色，近年來的研究成果經常入選CNS年度十大科學突破。目前在高等生物中，存在著一個巨大的、尚未被完全發現的RNA世界。人類基因組轉錄區高達76％，但轉錄產物中只有不到2％是編碼蛋白質的mRNA，其他都是非編碼RNA，其中microRNA （miRNA）、長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）、環狀RNA（circular RNA，circRNA）等調控性ncRNA因其重要的調控功能，受到科學家們廣泛關注。近年來，非編碼RNA一直是生命科學領域的研究熱點，也是國家自然科學基金等鼓勵申報的重要領域。該研究將從全新的角度揭示生命調控的分子機制，並為人類疾病的診斷和防治提供理論依據和新的技術。
Exosomes可以由多種細胞類型(免疫細胞、心血管細胞、神經細胞、幹細胞、腫瘤細胞)釋放，因此，exosomes也會參與多種生理或病理過程，如抗原呈遞、RNA轉運、組織修復、神經退行性疾病、腫瘤轉移、代謝重建等。Exosome中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸，能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。Exosome在體內存在的廣泛性和獲取的便捷性，已經成為了疾病診斷治療的潛在有效方式，在精準醫學發展上有著光明的前景。開展本次研討會的目標是為了讓剛接觸外泌體領域的年輕科研人員能掌握儘快上手做這方面的研究方法，為一些已經在外泌體研究中碰到問題的研究者解決實際科研問題。
1. 掌握調控性非編碼RNA常用分析工具使用方法
2. 熟悉10種調控性非編碼RNA研究思路
3. 掌握調控性非編碼RNA常用研究技術
4. 熟悉外泌體與調控性非編碼RNA關聯設計思路
5. 熟悉調控性非編碼RNA與外泌體相關國自然基金標書寫作
時間安排
課程表
介紹
第一天
9：00-10：30
調控性非編碼RNA簡介
調控性非編碼RNA概念及重要分類
調控性非編碼RNA的來源與生成機制
10：30-10：45
茶歇
10：45-12：00
調控模式及研究意義
調控性非編碼RNA的調控模式
調控性非編碼RNA研究意義
12：00-13：30
午飯及午休
13：30-15：00
調控性非編碼RNA常用研究技術（一）
表達譜晶片與RNA-seq數據分析
實時定量PCR
Northern Blot
原位雜交
Knock down和Over-expression
15：00-15：20
茶歇
15：20-17：30
調控性非編碼RNA常用研究技術（二）
RNA-RNA、RNA-DNA、RNA-蛋白質等相互作用研究技術
報告基因分析、ChIRP、RIP、RNA pull-down
轉錄調控技術：ChIP、EMSA、Oligo pull-down、Run on、Run off
第二天
9：00-10：30
調控性非編碼RNA相關資料庫介紹（一）
microRNA：miRbase、targetscan、mirtarbase、RNAhybrid等
10：30-10：45
茶歇
10：45-12：00
調控性非編碼RNA相關資料庫介紹（二）
lncRNA：rbpdb、lncRNAdb、LNCipedia等
circRNA：circBase、CircInteractome、circRNADb等
12：00-13：30
午飯及午休
13：30-15：00
外泌體與調控性非編碼RNA
外泌體概述
外泌體分離方法
外泌體檢測方法
外泌體常用資料庫
外泌體與miRNA、lncRNA、circRNA研究案例分析
15：00-15：20
茶歇
15：20-17：30
解讀標書及答疑
解讀並分享6份近三年非編碼RNA（lncRNA，circRNA，外泌體）相關國自然標書
現場答疑
孫教授獲得2019年醫藥加學習班金牌講師稱號！
主辦方：醫藥加科研培訓中心
承辦方：上海遐永醫藥科技有限公司
學費 2800元/每位（兩天集中網絡授課，互動性好，可開發票，可回放）
優惠政策
1. 疫情過後，可補差價參加醫藥加線下同名班
2. 參加過醫藥加同名線下班的學員，只要300元復聽費用（推薦新學員的，免收復聽費用）
3. 辦理了SCI與國自然VIP年卡的學員是免費參加的。
4. 分享到朋友圈並且推薦評論的，可以減免100元
注意：此次課程為線上直播教學模式，ZOOM網絡會議平臺授課，體驗與質量有保證！
報名付費成功後，提前發培訓需要應用到的軟體與課件，並且指導安裝。
參加培訓的學員課後可通過微信群繼續和老師交流，長期獲得指導機會。
可以開正規會務發票或者技術服務費發票。
網絡學習班報名或者辦卡請掃碼諮詢
醫藥加網絡精講學習班，科研專家授課，微信互動答疑，課後視頻可回放！
為幫助廣大初學者和具有一定基礎的研究者能更好掌握生信分析,回顧性臨床研究，網絡藥理，科研作圖，m6a等套路與常用技能， 考慮目前在疫情期間的實際情況，我們決定在6月份召開下面10門在線學習班，為了保證學習效果，我們採用國際頂級的Zoom網絡會議平臺授課，可回放，效果體驗好！
【詳細介紹請點擊下面對應課程標題】
【閱讀原文】看更多免疫細胞研究最新原創文獻報導