以下湊字數：
螢光不等於顏色，檢測器不識別顏色，都是後期加入的假顏色。
按照物質吸收光或電離輻射釋放的光叫螢光的定義。實際有很多光滿足這一條件，不是特別嚴謹的說法。例如白熾光有太陽風暴，燒火，火山爆發，白熾燈
生物發光有螢火蟲，水母。
為什麼只有特定波長的光才能激發特定的螢光蛋白或者染料呢？是因為電子被原子束縛住，只有特定能量的光才與電子相互作用。
經典的螢光可以用stoke位移來表示。但是也是無法區分螢光和磷光。
螢光有強度、光譜、螢光壽命等發射參數，也有偏振的各向異性等屬性。偏振的各項異性為光片顯微鏡成像奠定基礎。
螢光蛋白的選擇：
Single Color: mCherry or dTomato or EmGFPor EGFP
Two-color : mCherry + EmGFPor EGFP
Three-color : mCherry + Venus + mTurquoise2 (Cerulean)
EmeraldGFP,mCherry：superiorfolding
兩個艾裡斑中心之間的最小距離（d）用於定義光學解析度或分離能力，根據阿貝定律計算得出。這取決於物鏡的數值孔徑，而數值孔徑又取決於介質的折射率和發射光的波長。寬場顯微鏡可以將兩個200nm的點彼此分開（63×油浸物鏡，NA =1.32，發射波長510nm）。在光學系統中引入一個1Airy寬度的共焦針孔（即其孔徑與當前波長下的艾裡斑的直徑相對應）將使該橫向解析度提高大約30％。生物樣品要進行三維採集。因此，光的衍射圖應被視為三維信息，並用點擴散函數（PSF）定義。沿z軸的Airy圓盤看起來像橄欖球球一樣拉長，並且光的整體衍射圖樣沿z軸具有軸向對稱性，PSF的三維形狀類似於沙漏形（圖1F）。請記住，一個發光的納米小的物體仍然會產生一個圖像，該圖像的腰部至少為200nm，深度約為500nm（艾裡斑片所定義）。因此，任何共定位分析都必須在三維空間中進行。光學解析度的極限取決於PSF，並直接影響成像參數。一旦光學系統形成了圖像，它將由電子設備收集，該電子設備會將光信號轉換為電子信號，並在計算機進一步處理。