1.固定：去除殘留液體，用1X PBST清洗接種在乾淨玻片上的細胞3次，每次3min。在室溫下用新鮮配製的4%多聚甲醛固定15min。
2.1XPBST漂洗三次：去除固定液，1XPBST漂洗3次，每次5min。
3.透化：在1XPBST中加0.1% Triton X-100，孵育20分鐘以提高通透性。
4.1XPBST漂洗三次：去除殘留液體，1XPBST漂洗3次，每次5min。
5.封閉：去除殘留液體，在切片上加5% BSA或血清。確保血清與二抗來源於相同物種。然後在室溫下孵育20min。
6.孵育一抗：去除殘留液體，用適當稀釋比例的一抗覆蓋組織部位，4oC過夜孵育。
7.復溫：將切片從4oC移至室溫靜置約20min，不要立即衝洗切片。
8.1XPBST漂洗三次：去除殘留並浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重複3次。
9.孵育螢光偶聯的二抗：去除殘留液體，用適當稀釋比例的二抗覆蓋組織部位，4℃避光孵育60 min。
10.1XPBST漂洗三次：去除殘留並浸泡在PBST中，在搖床中以40 RPM漂洗5 min，重複3次。
11.滴加50% PBS+50% 甘油於玻片上，立即置於顯微鏡下觀察。