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【Protocol】 酵母單/雙雜交顯色實驗,X-gal還是X-α-gal ?
【BioLABs protocol】酵母雙雜交技術原理及實驗步驟【Protocol
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【酵母單/雙雜交】 酵母顯色實驗,X-gal還是X-α-gal ?
X-Gal是E.coli β-半乳糖苷酶(LacZ)的反應底物,而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶(MEL1)的反應底物。X-α-gal用作酵母雙雜交系統中藍白篩選的篩選標記。二者不可以互相替換。X-α-Gal檢測酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母雙雜交系統的一個報告基因,編碼分泌型的α-半乳糖苷酶。
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染色質免疫共沉澱(ChIP)技術
>1.1簡介染色質免疫共沉澱技術(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是一種檢測在體內自然染色質環境下蛋白和DNA相互作用的有效方法。這種方法是在體內確定DNA和蛋白質相互作用。與ChIP-on-Chip方法相比,成本低廉。目前實時定量染色質免疫共沉澱技術(qChIP)已經開始應用於分析減數分裂時期蛋白質和DNA相互作用的研究。
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136 染色質免疫沉澱技術資料和視頻
136 染色質免疫沉澱技術資料和視頻
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免疫螢光染色技術您知多少?
免疫螢光技術就是將不影響抗原抗體活性的螢光色素標記在抗體(或抗原)上,其與相應的抗原(或抗體)特異性結合後,用特定儀器可使特異性的螢光物質被定位和定量識別
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教授SCI經驗傳授:打死也要掌握的6種細胞實驗與方法描述
細胞凋亡的檢測方法 包括:Caspase活性檢測;DNA片段化分析和檢測;流式細胞術檢測;膜變化檢測(AnnexinV染色、膜 電位、線粒體功能完整性分析檢測實驗)及細胞形態學檢測。 結果評判 Ⅰ 期:細胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased), 部分染色質出現濃縮狀態;Ⅱa 期:細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;Ⅱb 期:的細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體③ TUNEL(原位缺口末端標記技術(in situ end labelling
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染色質免疫沉澱測序技術獲突破
,成功實現了針對1000個細胞的染色質免疫沉澱測序(ChIP-Seq),大幅減少了這類實驗中對樣品起始量的要求,並利用這一方法研究了組蛋白H3第4位賴氨酸的3甲基化修飾(H3K4me3)在小鼠胚胎發育過程中的修飾模式,發現與小鼠胚胎幹細胞相比,小鼠表皮幹細胞與小鼠胚胎發育至6.5天的外胚層細胞在該修飾模式上更為相似,表明小鼠表皮幹細胞是體內植入後外胚層細胞的一個可靠的體外模型。
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蛋白質與DNA相互作用研究中的染色質免疫沉澱技術(ChIP)
目前體外診斷技術主要是在體外實驗中研究各種生物大分子如DNA、酶、抗原抗體等的功能和特性,雖然可以用生物緩衝液及各種輔助試劑模擬體內環境,但這並不能完全反應生命體或者活體細胞內的真實情況。在這個方向上,染色質免疫沉澱技術ChIP則取得了突破。
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3分鐘快速了解病理切片常用染色方法
天狼星紅染色 偏振光番紅-固綠染色主要用途:可以直觀反映關節軟骨、軟骨下骨和骨組織的結構。組織學、病理學教學與科研中最基礎、使用最廣泛的技術方法之一檢驗原理:蘇木精染液為鹼性,可以將組織的嗜鹼性結構(如核糖體、細胞核及細胞質中的核糖核酸等)染成藍紫色;伊紅為酸性染料,可以將組織的嗜酸性結構(如細胞內及細胞間的蛋白質,包括路易體、酒精小體以及細胞質的大部分)染成粉紅色,使整個細胞組織的形態清晰可見。
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免疫螢光染色技術
(四)染色染色分直接染色法與間接染色法。1.:①取固定標本,加已知的免疫血清,37℃孵育30min;②以螢光強度的表示方法如下:因此給標本的保存帶來一定的困難,所以在標本進行螢光染色之後應立即觀察。保存的方法可採取以下幾種:①固定標本片以後低溫保存,隨用隨染;②染色片採取優質封固劑,如特別的螢光封固劑(
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前列腺癌抵抗免疫治療,是因為……
我們都知道,T細胞對癌症的免疫治療的成功至關重要。最近,來自美國德克薩斯大學MD安德森癌症中心的研究人員在一項新的研究中,發現轉移到骨骼的前列腺癌會引發骨組織破壞,進而阻礙了T細胞的發育,嚴重影響免疫檢查點抑制劑的有效性。
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免疫組化技術——典型實驗案例學習
我以前一直用中杉金橋的Sp三步法染色試劑盒,效果不錯,在奧運會期間我準備做同批實驗分不同批次酶免疫組化實驗,第一批組化實驗結果很好,抗體濃度感覺比較合適(Santa Cruz公司1:200),等做第二批時發現封閉血清不夠了,為了保證實驗順利進行,我又從福州邁新頂了一個SP試劑盒,同時抗體稀釋液也不夠了,我又重新從博士德公司買了一小瓶10ml。
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組織透明技術(Tissue Clearing),一眼「看透」整個組織染色
在神經科學領域,若要研究大腦組織/細胞的靶蛋白表達、定位情況,以往常常會經歷切片(獲得微米級腦片)、固定、使用免疫組織化學(IHC)方法進行切片染色、成像等一系列流程,甚至,在研究大型組織時,還要再將大量的切片染色結果進行整合,顯然,整個實驗過程耗時又費力。
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貼壁細胞免疫螢光染色
免疫螢光染色實驗是細胞生物學中檢測蛋白表達的常見方法,如何做好免疫螢光染色實驗尤為重要。1. 細胞爬片免疫螢光實驗用到的原理是抗原與抗體特異性結合。因此為了便於操作,通常將細胞接種在蓋玻片上。而細胞很難在蓋玻片上生長,所以在開始實驗前要將蓋玻片以多聚賴氨酸包被。將蓋玻片浸泡在消毒酒精中過夜,鑷子夾取一片蓋玻片並在酒精燈旁烘乾,待其冷卻後放入六孔板。以免溫度過高導致六孔板底部融化。加入多聚賴氨酸溶液,以覆蓋蓋玻片為準,避光孵育30分鐘以上,然後吸去液體,風乾以備用。
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知無不「研」|一文讀懂染色質免疫共沉澱技術(ChIP)
染色質免疫共沉澱技術(ChIP)基於體內分析而發展的染色質免疫沉澱分析(Chromatin immunoprecipitation assay kit,ChIP)技術可以真實、完整地反映結合在由於ChIP採用甲醛固定活細胞或者組織的方法,因此能比較真實的反映細胞內TF與Promoter的結合情況,還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關係。近年來,這種技術得到不斷的發展和完善。採用結合微陣列技術在染色體基因表達調控區域檢查染色體活性,是深入分析癌症、心血管病以及中央神經系統紊亂等疾病主要通路的一種非常有效的工具。
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染色質免疫共沉澱(ChIP)原理及注意事項 | 實驗外包
染色質免疫共沉澱(ChIP)作為目前為止唯一的研究體內DNA與蛋白質相互作用的實驗方法,深得人心。很多人都希望接觸和掌握此實驗技術,希望從組蛋白修飾、轉錄調控、凋亡等角度深入研究病變機制,進而開發相應的藥物。總之,ChIP是一個有效且重要的實驗技術。下面就來聊聊它。
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實驗專欄丨免疫螢光細胞化學染色方法,你會做嗎?
二、螢光抗體染色方法 ➤ 直接法 1.染色 切片經固定後,滴加經稀釋至染色效價如1:8或1:16的螢光抗體(如兔抗人γ-球蛋白螢光抗體或兔抗人IgG或IgA螢光抗體等),在室溫或37℃染色30min,切片置入能保持潮溼的染色盒內,防止乾燥。
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β-葡聚糖,開啟免疫系統的正確方法
去年年底,來自荷蘭內梅亨大學等機構的研究人員在Cell上發表報導稱,在血液中毒(敗血症)期間,免疫系統功能障礙能夠被一種特定的糖逆轉。這種被研究人員稱之為免疫系統「控制開關」的「特定的糖」正是β-葡聚糖。
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第三節 免疫螢光細胞化學染色方法
第三節 免疫螢光細胞化學染色方法 一、標本製作 可製作塗片、印片、細胞單層培養物、組織切片,經適當固定或不固定,作免疫螢光染色用。 二、螢光抗體染色方法 (一)直接法 1.染色 切片經固定後,滴加經稀釋至染色效價如1:8或1:16的螢光抗體(如兔抗人γ-球蛋白螢光抗體或兔抗人IgG或IgA螢光抗體等),在室溫或37℃染色30min,切片置入能保持潮溼的染色盒內,防止乾燥。
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四點建議,讓你的免疫螢光染色少走彎路
不過,儘管免疫螢光技術能夠提供靈敏而準確的結果,並適合多重檢測,但優化還是必不可少的。在此,MilliporeSigma 的培訓經理Chandra Mohan博士和抗體驗證科學家Robin Clark博士分享了他們在免疫螢光染色方面的成功經驗。